關鍵詞:食品檢測;氣相色譜技術;反式脂肪酸
、材料與方法 1.1儀器與試劑
氣相色譜儀,C-R7Ae數據處理機,OPGU-1500S氫氣發生器。脂肪酸甲脂標準品:Sigma公司產品,共18種;其中 飽和脂肪酸甲酯有C10:0,C12: 0, C14:0, C16:0, C17:0, C18:0, C20:0, C22:0和 C24: 0共9種;不飽和脂肪酸甲酯有C16: 1n-9 (trans), C16:1n-9 (cis), C18:1n- 6(cis),C18:1n-9(cis),C18:1n-11(cis), C18:1n-9 (trans), C18:1n-11 (trans), C18: 2n-9, 12(cis)和C18 : 2n-9, 12 (trans)共 9種。以正己烷為溶劑,制成約0. 4mg/ml的標 準液。試劑:正己烷、氫氧化鈉、氯化鈉、甲 醇、3氟化硼,均為分析純。樣品選用黃油、 全脂奶粉和人造奶油。 1.2色譜條件
選用CP-Sil88FAME毛細管石英柱(100mX 0.25irnX0.20Wm),FID檢測器,載氣為高純氮 氣,壓力為300Wa,氫氣壓力50kPa,空氣壓力 50Wa);進樣口溫度250。C,檢測器溫度260。C; 柱溫采用三級程序升溫:初始溫度110。C,保持 4min;以3°C/min升溫至170°C;再以2°C/min升 溫至200。C;zui后再以3。C/min升溫至230。C,保 持6min。分流比為1:40。 1.3樣品甲酯化
一般食品按照GB/T5009. 6食品中脂肪的 測定方法進行脂肪提取。乳及乳制品則按照 方法GB/T5009.46提脂。取適量提取的脂肪或 油脂樣品直接按照GB/T17376-1998中的方法 制備動植物油脂的脂肪酸甲酯,即先用適量氫 氧化鈉甲醇溶液回流后加入12%?15%的3氟 化硼甲醇溶液,再回流,加入正己烷和飽和氯 化鈉溶液,振蕩萃取后取正己烷層于氣相色譜 上分析。
、結果
順、反式脂肪酸的分離情況 由圖1脂肪酸甲酯標準品色譜圖可見,大 部分飽和脂肪酸之間、飽和脂肪酸與不飽和 脂肪酸之間、不飽和脂肪酸中的順式與反式 之間都分離得很好,只有脂肪酸甲酯C18:1n- 6(cis)、C18:1n-9(cis)和C18:1n-11(cis) 之間、以及脂肪酸甲酯C18:1n-9(trans)和 C18:1n-11(trans)之間分離不夠理想,*滿 足檢測要求。
線性范圍和檢出限
選用脂肪酸C16:0甲酯和脂肪酸C18:0甲 酯標準品,配制成濃度0.050?1.500mg/m的混 合標準液。脂肪酸C16:0甲酯的線性回歸方程 Y=565413X+1124(r=0.997,n=5);脂肪酸C18:0 甲酯的線性回歸方程Y=577448X+1371 (r=0. 9 98, n=5);以基線噪聲的2倍所對應的濃度為 方法的檢出限,脂肪酸C16:0甲酯的檢出限為 8.1wg/ml、脂肪酸C18:0甲酯為8.9wg/m,l *可以滿足檢測要求。 2.3加標回收試驗
取同一人造奶油樣品提取的脂肪2份,分 別選擇2個水平,加入脂肪C18:1n-9(cis)甲 酯標準品和脂肪酸C18:1n-9(trans)甲酯標準 品,毎個水平檢測兩次,檢測結果取均值,回收 率為98.33%?100.6%。見表1。 2.4反式油酸含量的檢測 通過檢測,黃油和人造奶油檢測到了反式 脂肪酸,以外標法進行定量分析,4種樣品的 分析結果見表2。 表2 4種.
反式脂肪酸的來源 3.1.1反芻動物脂肪及其乳脂 反芻動物(如牛、羊、馬等)的脂肪組織 和乳及乳制品,反芻動物體內脂經其體內微生 物部分氫化作用而產生少量反式不飽和脂肪 酸,反芻動物體脂中TFAs的含量占總脂肪酸 的4%11%,牛奶、羊奶中的含量占總脂肪的 33%?5%。
氫化加工的植物油脂 天然油脂如:大豆油、菜籽油,它們脂肪 酸的存在形式是順式結構,而在油脂的氫化過 程,油脂中不飽和的雙鍵轉變為單鍵的同時, 則產生了部分異構化的反式脂肪酸。人造黃 油、人造奶油、起酥油等均屬于氫化油脂,它 們中反式脂肪酸含量一般在5%?45%之間,zui 高可達65%。當它們作為原料被添加到食品中 時,會使得食品中含有反式脂肪酸。 3.2各種脂肪酸的分離情況 雖然脂肪酸C18:1n-9 (trans)和C18 : 1n- 9(trans)兩者之間及脂肪酸C18:1n-6(cis)、
和C18:1n-11(cis)三者之間分 離不很*,但反式脂肪酸C18:1(trans)與順 式脂肪酸C18:1(cis)之間分離尚好,可以滿足 反式脂肪酸的檢測要求。
脂肪酸C10:0至C24 : 0, 8種偶數碳飽和脂 肪酸,由低碳數先、高碳數后極有規律地有序 出峰。某一同碳數的飽和脂肪酸的色譜峰位 于不飽和脂肪酸之前,如脂肪酸C16:0位于脂 肪酸C16:1之前;同碳數的不飽和脂肪酸,烯鍵 少先出峰,如脂肪酸C18: 1位于脂肪酸C18: 2 之前;順式、反式脂肪酸的色譜峰相鄰,反式 位于順式之前,如脂肪酸C16:1n-9(trans) 位于脂肪酸C16:1n-9(cis)之前、脂肪酸 C18:1n-9 (trans)位于脂肪酸C18 : 1n-9 (cis) 之前;同一異構體的不飽和脂肪酸,烯鍵位于 碳原子序數大的色譜峰居于序數小的之前。 3.3毛細管色譜柱的選擇 有實驗表明,色譜柱長短明顯影響各種脂 肪酸的分離效果。選用50m長色譜柱,可以達 到各種飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸良好的分 離效果。若要*分離檢測順、反式脂肪酸, 應采用100m長色譜柱。當然也不是柱越長越 好。
柱溫對實驗結果的影響 不同的柱溫條件,會對反式脂肪酸的色 譜峰分離產生影響。按Subrama-niam等選 用的柱溫一級程序升溫方法,脂肪酸C16:0與 C20:0之間的出峰時間間距太近,這兩種脂肪 酸之間的脂肪酸C16:1n-9(cis)、C16:1n- 9 (trans)、C18:0、C18: 1n-6(cis)、 C18:1n-9(cis)、 C18:1n-11(cis)、 C18:1n- 6(trans)、 C18:1n-9 (trans)、 C18:1n- 9 (trans)、C18:2n-9. 12(cis)和C18:2n- 9.12(trans)等11種脂肪酸過于擁擠、分離效 果不好。
采用3級程序升溫方法,目的是在第二級 程序升溫中降低色譜柱的升溫速度,擴大脂肪 酸C16:0與脂肪酸C20:0之間的出峰時間間距, 使得11種脂肪酸達到更好的分離。
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